細(xì)胞培養(yǎng)過程中時常會出現(xiàn)這樣或那樣的問題,別小看細(xì)胞培養(yǎng),里面卻蘊含著大學(xué)問.通過與使用者溝通你會發(fā)現(xiàn)了很多可以避免的問題發(fā)生,下面對細(xì)胞培養(yǎng)過程中存在的幾大誤區(qū)做詳細(xì)解析。
誤區(qū)一
XX實驗室培養(yǎng)XX細(xì)胞用的就是這個培養(yǎng)基，我用一樣的就可以
?選擇培養(yǎng)基沒有一定的標(biāo)準(zhǔn)，有幾點建議可供參考：
首選：建立該細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基
參考：文獻(xiàn)
嘗試：實驗室常用的培養(yǎng)基
按需：根據(jù)細(xì)胞株的特點、實驗的需要來選擇
最客觀：用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)，根據(jù)實際效果選擇，但較繁瑣
誤區(qū)二
長期使用抗生素，以對抗污染
? 細(xì)胞培養(yǎng)時不應(yīng)常規(guī)使用抗生素
? 連續(xù)使用抗生素會促進(jìn)抗生素耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在，一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除，這種輕度污染最終將發(fā)展成大規(guī)模污染
? 連續(xù)使用抗生素會掩蓋支原體感染及其他隱性污染
? 有些抗生素會與細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng)，干擾您研究的細(xì)胞過程
誤區(qū)三
培養(yǎng)基中的谷氨酰胺容易降解，需要不斷補充
如果正確使用，一般不需要補加
? 4℃避光保存
? 分裝，不要反復(fù)預(yù)熱
? 含有谷氨酰胺的培養(yǎng)基，開封后應(yīng)盡快用完
誤區(qū)四
培養(yǎng)基誤存于-20℃,溶解后繼續(xù)使用
? 在-20℃下，培養(yǎng)基中的鹽容易析出，培養(yǎng)基再次融化后，有的鹽可能無法重新溶解，從而導(dǎo)致培養(yǎng)基營養(yǎng)成分和滲透壓改變，培養(yǎng)細(xì)胞時，容易細(xì)胞破裂而死亡
? 建議丟棄該培養(yǎng)基,重新購買新的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)
誤區(qū)五
常見細(xì)胞系無需檢測血清批次，可以直接切換
? 血清來源于動物，組成成分有1000種左右，每個批號的組分和組分含量都是不確定的，批間差異是可能存在的
? 如果某一個批次血清使用效果較好，記住批號，訂貨的時候給予說明
? 如果需要換不同批號的血清，提前查詢COA文件，尋找測試結(jié)果接近的批次
? 先訂購一瓶試用，試用成功之后再大量訂購該批號血清
誤區(qū)六
血清滅活以后使用效果更好
? 血熱滅活的血清對大多數(shù)細(xì)胞而言是不需要的，高溫處理可能影響了血清的品質(zhì)，造成細(xì)胞生長速率的降低，經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物增多
? 滅活補體系統(tǒng)
補體參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，刺激平滑肌收縮等
? 在免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時，推薦使用熱滅活血清
血清必須熱滅活？
熱滅活是指將血清于56℃處理30分鐘，滅活血清中的補體。
實驗表明，經(jīng)熱滅活的血清對細(xì)胞生長可能僅有微小促進(jìn)或完全沒有任何作用，甚至通常因高溫處理而損失掉血清中部分營養(yǎng)成分，從而影響血清質(zhì)量，造成細(xì)胞生長速率降低。熱滅活過程中因局部溫度過高、搖晃不均勻或滅活時間過長，都會造成血清品質(zhì)下降。且經(jīng)熱滅活后的血清會增加發(fā)生蛋白沉淀概率，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像是“小黑點”，通常會讓研究者誤以為是血清遭受污染。
因此，若非必須血清不需要做熱滅活，而少數(shù)對補體敏感的細(xì)胞實驗，如某些免疫學(xué)實驗或腺病毒包裝等，可酌情對血清進(jìn)行熱滅活操作。
熱滅活方法示例：
1.熱滅活前須先搖勻解凍后的血清并恢復(fù)至室溫；
2.取部分搖勻血清置于50ml離心管中，并準(zhǔn)備同規(guī)格對照管一個；
3.對照管內(nèi)加入血清等體積水；
4.對照管內(nèi)插入溫度計進(jìn)行溫度預(yù)試，當(dāng)溫度達(dá)到56℃時將恢復(fù)至室溫的血清放入水浴鍋30min；
5.滅活過程中需要每隔5min輕輕晃動搖勻，以保證溫度均一。
誤區(qū)七
原代細(xì)胞的培養(yǎng)及操作與傳代細(xì)胞一樣
? 與細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細(xì)胞進(jìn)行實驗以防止遺傳漂移。
? 當(dāng)細(xì)胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶并在顯微鏡下密切監(jiān)測細(xì)胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細(xì)胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細(xì)胞。
? 通常我們不推薦重新凍存原代細(xì)胞，因為這可以促進(jìn)細(xì)胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代?xì)胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡或損傷。
? 原代細(xì)胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴中，保持并輕輕旋轉(zhuǎn)直到內(nèi)容物剛剛解凍是很重要的。然后應(yīng)立即從水浴中取出小瓶，并轉(zhuǎn)移到無菌操作臺。確保您的培養(yǎng)瓶在解凍前已經(jīng)準(zhǔn)備就緒，以便可以立即用于接種細(xì)胞，并置于培養(yǎng)箱中。
? 我們不建議在解凍后離心細(xì)胞，因為離心程序比少量的DMSO殘留更有害。記住，在恢復(fù)原代細(xì)胞后的第二天更換培養(yǎng)基以去除任何殘留的DMSO。
